@article{RESEARCH, recid = {75779}, author = {鄭櫻慧 (Cheng, Ying-Huey) and 陳金枝 (Chen, Chin-Chih) and 王昭月 (Wang, Jau-Yeuh) and 江佳典 (Chiang, Chia-Dian) and 張清安 (Chang, Chin-An)}, title = {開發可區分辣椒葉脈斑駁病毒與番椒葉脈斑駁病毒的核酸和血清檢測方法 Development of nucleic acid and serological methods for differentiation of Chilli veinal mottle virus and Pepper veinal mottle virus}, journal = {台灣農業研究 (JOURNAL OF TAIWAN AGRICULTURAL RESEARCH)}, address = {2022}, number = {RESEARCH}, abstract = {辣椒葉脈斑駁病毒(chilli veinal mottle virus; ChiVMV)和番椒葉脈斑駁病毒(pepper veinal mottle virus; PVMV)都是茄科番椒屬作物的Potyvirus屬病毒,且在potyviruses中,二者的鞘蛋白相似度最高,因此有高強度抗血清相關性,即利用純化病毒或鞘蛋白製備的多元抗體無法區分此二病毒。比對ChiVMV與PVMV的鞘蛋白基因與3'非轉譯區,以鞘蛋白N端與3'非轉譯區差異最大。因3'非轉譯區長度差異大,以此區域設計專一性引子進行反轉錄聚合酶連鎖反應(reverse transcription-polymerase chain reaction; RT-PCR),利用增幅產物分子量大小不同,可以區分此二病毒。製備專一性抗血清則利用ChiVMV與PVMV之鞘蛋白N端差異大區域,以ChiVMV之鞘蛋白N端39個胺基酸(4.3 kDa),後接綠色螢光蛋白(28.2 kDa),使其成為複合蛋白加大分子量加強免疫反應,再以pET-28b(+)為表現載體,於Escherichia coli Rosetta產生一32.5 kDa之複合表現蛋白。大量表現此複合蛋白,加以純化後進行白兔免疫注射,獲得之多元抗體,進行enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)或西方漬染法,均可正確檢出感染ChiVMV之材料,而不與PVMV感染的煙草、甜椒和健康植株反應。用在檢測田間樣本時,與純化病毒製備之抗血清比較,可正確區分樣本是否為ChiVMV感染。比起製備單元抗體,利用細菌表現蛋白製備專一性多元抗血清,可不須經過繁複的步驟即可快速且簡便地得到ChiVMV專一性多元抗血清。}, url = {http://worldveg.tind.io/record/75779}, doi = {https://doi.org/10.6156/JTAR.202209_71(3).0004}, }